海城地区温室蔬菜灰霉病菌对6种药剂的抗药性检测

辽宁农业科学 2019( 1) : 42 ～44Liaoning Agricultural Sciences文章编号 : 1002 －1728( 2019) 01 －0042 －03 doi: 10．3969/j． issn．1002 －1728．2019．01．010海城地区温室蔬菜灰霉病菌对6种药剂的抗药性检测*赵 杨 ， 孙柏欣 ， 陈 乐 ， 苗则彦( 辽宁省农业科学院植物保护研究所 /辽宁省农作物有害生物控制重点实验室 ， 辽宁 沈阳 110161)摘要 : 采用菌丝生长速率法 ， 对辽宁省海城地区温室蔬菜灰霉病菌进行 6 种药剂抗药性检测 。结果表明 ， 灰霉病菌对嘧霉胺表现高抗 ， 建议生产上暂停使用 ; 对腐霉利 、啶酰菌胺 、咯菌腈的 EC50最高值及平均值较已报道数值均有提高 ， 应加强抗药检测及治理 。对氟啶胺和氟吡菌酰胺的 EC50范围分别为 0． 013 ～0． 066 μg/ml 和0．027 ～5．434 μg/ml， 平均 EC50分别为 0．035 μg/ml 和 0． 963 μg/ml， 对氟啶胺和氟吡菌酰胺均表现敏感 ， 可做为主要防治药剂科学使用 。关键词 : 灰霉病菌 ( Botrytis cinerea) ; 抗药性检测 ; 毒力测定中图分类号 : S436．412．1+3 文献标识码 : B由灰葡萄孢 ( Botrytis cinerea Pers． ) 引起的灰霉病 ， 是温室蔬菜的重要病害之一 ， 病原菌寄主多达 230 余种 ， 可侵染茎 、叶 、花和果实 ， 为害十分严重 ， 生产上主要以化学药剂防治为主 。由于该病原菌具有高度异质性 ， 变异速度快 ， 因此 ， 极易产生抗药性 。辽宁沈阳 、大连 、鞍山等地区菌株对嘧霉胺表现高抗［ 1］。研究发现 ， 2017 年辽宁省内番茄灰霉病菌对腐霉利抗药性呈加重趋势 ， 中抗菌株占主体地位 ， 且在部分地区发现高抗菌株［ 2］。武汉地区出现抗啶酰菌胺菌株 ， 山东地区出现中抗啶酰菌胺菌株 ， 但辽宁菌株对啶酰菌胺表现敏感［ 3 ～5］。山东地区已出现低抗咯菌腈菌株 ， 辽宁地区菌株对咯菌腈表现敏感［ 6 ～7］。目前 ， 氟啶胺是国际上防治灰霉病的主要药剂之一 ，中国主要登记根肿病 、晚疫病及早疫病等病害防治 ， 尚未在灰霉病上登记 。山东省 、河北省和福建省已建立灰葡萄孢对氟啶胺的敏感基线 ， 且相继报道氟啶胺与嘧霉胺 、多菌灵 、异菌脲 、乙霉威 、啶酰菌胺 、腐霉利 、啶氧菌酯之间不存在交互抗性［ 8 ～9］。2017 年上海地区的 20%番茄灰霉病菌菌株对氟吡菌酰胺表现高抗［ 10］。辽宁省海城地区温室蔬菜种植时间长 ， 面积逐年增加 ， 一些药剂常年使用 ， 防效逐年下降 ， 因此 ， 抗药性检测十分必要 。明确灰霉病菌对几种药剂的抗性水平 ， 为更有效地指导田间灰霉病防治提供理论依据 。1 材料与方法1. 1 试验材料1. 1. 1 供试菌株2017 ～2018 年从辽宁海城地区温香镇 、望台镇 、耿庄镇 、腾鳌镇采集温室蔬菜灰霉病病样 ， 分离纯化后于 4 ℃低温保存备用 。1. 1. 2 供试药剂及培养基98．2%嘧霉胺原药 ， 昆山瑞泽农药股份有限公司 ;93%腐霉利原药 ， 连云港优士化学品有限公司 ; 97% 咯菌腈原药 ， 山东奥得利化工有限公司 ; 98% 氟啶胺原药 ， 山东申达作物科技有限公司 ; 98% 啶酰菌胺原药 ， 河北美星化工有限公司 ; 41．7% 氟吡菌酰胺德国拜耳作物科学公司 。除嘧霉胺试验用 L-asp 培养基外 ， 其他药剂试验均用PDA 培养基 。1. 2 试验方法1. 2. 1 室内毒力测定方法采用菌丝生长速率法 。将原药溶于少量丙酮 ， 用无菌水配成浓度为 100 μg/ml 的母液 ， 再用无菌水稀释成系列浓度的药液 ， 制备药剂质量浓度分别为嘧霉胺 ( 3． 500、7．000、14． 000、28． 000、56． 000、112． 000 μg/ml) ; 腐霉利( 0．0064、0．032、0． 160、0． 800、4． 000、20． 000 μg/ml) ; 啶酰菌胺 ( 1． 600、2． 400、3． 600、5． 400、8． 100、12． 150 μg/ml) ; 咯菌腈 ( 0． 080、0． 208、0． 541、1． 406、3． 656、9． 505μg/ml) ; 氟啶胺 : ( 0． 011、0． 019、0． 034、0．062、0． 111 和* 收稿日期 : 2018 －12 －21基金项目 : 辽宁省村级综合服务平台建设项目作者简介 : 赵杨 ( 1983 － ) 男 ， 辽宁省沈阳人 ， 助理研究员 ， 主要从事蔬菜病害防治研究 。E-mail: 15940065218@126． com通讯作者 : 苗则彦 ( 1968 － ) ， 女 ， 研究员 ， 主要从事蔬菜病害研究 。E-mail: mzyln@ aliyun． com第 1 期 赵 杨等 : 海城地区温室蔬菜灰霉病菌对 6 种药剂的抗药性检测0．200 μg/ml) ; 氟吡菌酰胺 ( 0． 012、0． 047、0． 188、0． 750、3． 000 和 12． 000 μg/ml) 的含药平板 。将病原菌分别在PDA 平板上培养 3 d 后 ， 沿菌落边缘打取直径为 5 mm 的菌饼 ， 菌丝面朝下接种于配制的含药平板中央 ， 每皿 1 个菌饼 ， 以不加药的平板为对照 ， 每处理 4 次重复 ， 25 ℃培养 3 d， 用十字交叉法测量菌落直径 ， 根据各处理的平均菌落直径净增长值 ， 利用 DPS 软件求出各种药剂对各菌株的毒力回归方程和 EC50。1. 2. 2 抗性水平测定嘧霉胺敏感性基线为 0． 0911 μg/ml［ 11］; 腐霉利敏感性基线为 ( 0．31 ±0． 08) μg/ml［ 12］; 啶酰菌胺敏感性基线为 ( 1． 9731 ± 1． 0011) μg/ml［ 5］; 咯菌腈敏感性基线为( 0．0073 ± 0． 0454) μg/ml［ 7］; 氟啶胺敏感性基线为( 0．0221 ± 0． 0098) μg/ml［ 9］; 氟吡菌酰胺敏感性基线为( 1．94 ±1．55) μg/ml［ 13］。抗性水平 = 供试菌株 EC50值 /敏感性基线抗性水平 ≤5 为敏感菌株 ; 5 ＜ 抗性水平 ≤10 为低抗菌株 ; 10 ＜ 抗性水平 ≤40 为中抗菌株 ; 抗性水平 ＞40 为高抗菌株［ 1］。2 结果与分析灰霉病菌对嘧霉胺的 EC50范围为 10． 044 ～ 79． 398μg/ml， 平均 EC50为 31． 523 μg/ml， 全部样品对嘧霉胺均表现高抗 。2014 年鞍山地区 ( 海城 、台安 、岫岩 ) 番茄灰霉病菌对嘧霉胺的 EC50值为 25． 481 ～ 39． 613 μg/ml、平均EC50值为 33． 057 μg/ml， 目前 ， 样品的最高 EC50值提高2．00倍 ， EC50平均值提高 0． 95 倍［ 1］。4 个样品对腐霉利抗药性表现敏感其余为低抗和中抗 ， EC50范围为 0．305 ～12．208 μg/ml， 平均 EC50为 4． 180 μg/ml。2014 年鞍山地区番茄灰霉病菌对腐霉利的 EC50值为 1． 237 ～ 3． 89 μg/ml、EC50平均值为 2．903 μg/ml， 目前 ， 样品的最高 EC50值提高 3． 138 倍 ， EC50平均值提高 1． 44 倍［ 1］。6 个样品对啶酰菌胺表现为低抗其余为敏感 ， EC50范围为 5． 227 ～13．353 μg/ml， 平均 EC50为 8． 87 μg/ml， 2015 年鞍山地区番茄灰霉病菌对啶酰菌胺的 EC50值为 1．2785 ～ 3． 0818μg/ml， EC50平均值为 1． 9305 μg/ml， 目前 ， 样品的最低EC50值升高 4． 09 倍 ， 最高 EC50值升高 4． 33 倍 ， EC50平均值升高 4．60 倍［ 5］。6 个样品对咯菌腈抗药性表现敏感其余为低抗和中抗 ， EC50范围为 0． 002 ～ 0． 155 μg/ml， 平均EC50为 0． 056 μg/ml， 2014 年海城地区病菌对咯菌腈的EC50值为 0． 0016 ～ 0． 0244 μg/ml、平均 EC50值为 0． 009μg/ml， 未出现抗性菌株［ 7］。近几年 ， 随着咯菌腈在海城地区的大面积使用 ， 目前样品的最高 EC50值提高 6． 35倍 ， 平均值提高 6．22 倍 ; 病菌对氟啶胺表现敏感 ， EC50范围为 0． 013 ～ 0． 066 μg/ml， 平均 EC50为 0． 035 μg/ml; 病菌对氟吡菌酰胺表现敏感 ， EC50范围为 0．027 ～5．434 μg/ml， 平均 EC50为 0．963 μg/ml( 见表 1) 。表 1 海城地区温室灰霉病菌对药剂的敏感性编号 地点嘧霉胺 腐霉利毒力方程EC50抗性评价毒力方程EC50抗性评价1 温香镇东高村 Y = －2．029 +1．721x 15．092 H Y = －0．429 +0．529x 6．481 M2 温香镇东高村 Y = －1．906 +1．059x 63．202 H Y = －0．594 +1．382x 2．694 L3 温香镇达连村 Y = －1．591 +1．114 x 26．782 H Y = －1．425 +1．588x 7．897 L4 望台镇邢家村 Y = －1．681 +1．093x 34．543 H Y = －1．319 +1．318x 10．024 M5 望台镇邢家村 Y = －1．587 +1．125x 25．717 H Y = －0．195 +1．171x 1．467 S6 望台镇官草村 Y = －2．031 +1．338x 32．987 H Y = －0．314 +1．319x 1．729 L7 望台镇官草村 Y = －2．541 +1．613x 37．608 H Y = －1．250 +1．438x 7．401 M8 望台镇前望台村 Y = －1．778 +1．391x 18．974 H Y = －0．464 +1．406x 2．140 L9 望台镇前望台村 Y = －1．260 +1．210x 10．997 H Y =0．385 +0．746x 0．305 S10 望台镇道沿村 Y = －1．167 +1．165x 10．044 H Y = －0．194 +0．775x 1．781 L11 耿庄镇古城村 Y = －1．182 +1．109x 11．635 H Y = －0．066 +1．027x 1．159 S12 耿庄镇古城村 Y = －2．371 +1．712x 24．258 H Y =0．359 +0．697x 0．305 S13 耿庄镇北耿村 Y = －1．480 +0．871x 50．081 H Y = －1．683 +1．549x 12．208 M14 腾鳌镇东新村 Y = －2．435 +1．281x 79．398 H Y = －0．509 +1．089x 2．933 L啶酰菌胺 咯菌腈1 温香镇东高村 Y = －0．549 +0．765x 5．227 S Y =0．461 +0．231x 0．010 S2 温香镇东高村 Y = －0．761 +0．941x 6．440 S Y =0．417 +0．362x 0．070 S3 温香镇达连村 Y = －1．248 +1．143x 12．356 L Y =0．383 +0．332x 0．070 S4 望台镇邢家村 Y = －0．763 +0．944x 6．425 S Y =0．428 +0．162x 0．002 S5 望台镇邢家村 Y = －0．656 +0．852x 5．892 S Y =0．296 +0．330x 0．127 L6 望台镇官草村 Y = －1．013 +0．997x 10．363 L Y =0．380 +0．339x 0．075 S7 望台镇官草村 Y = －0．757 +0．903x 6．880 S Y =0．520 +0．405x 0．052 S·34·辽 宁 农 业 科 学 2019 年编号 地点嘧霉胺 腐霉利毒力方程EC50抗性评价毒力方程EC50抗性评价8 望台镇前望台村 Y = －1．002 +0．979x 10．564 L Y =1．176 +0．655x 0．016 S9 望台镇前望台村 Y = －1．148 +1．020x 13．353 L Y =0．385 +0．313x 0．072 S10 望台镇道沿村 Y = －0．909 +0．925x 9．607 S Y =0．360 +0．171x 0．008 S11 耿庄镇古城村 Y = －1．035 +1．035x 10．000 L Y =0．244 +0．301x 0．155 L12 耿庄镇古城村 Y = －1．311 +1．168x 13．232 L Y =0．699 +0．281x 0．003 S13 耿庄镇北耿村 Y = －0．798 +0．935x 7．124 S Y =0．757 +0．457x 0．022 S14 腾鳌镇东新村 Y = －0．794 +0．960x 6．727 S Y =0．409 +0．415x 0．104 S氟啶胺 氟吡菌酰胺1 温香镇东高村 Y =1．648 +1．266x 0．050 S Y =0．365 +0．497x 0．185 S2 温香镇东高村 Y =2．112 +1．393x 0．031 S Y =0．023 +0．690x 0．927 S3 温香镇达连村 Y =1．844 +0．980x 0．013 S Y = －0．876 +0．839x 1．272 S4 望台镇邢家村 Y =1．930 +1．347x 0．037 S Y =0．176 +0．800x 0．601 S5 望台镇邢家村 Y =1．711 +1．138x 0．031 S Y =0．431 +0．854x 0．313 S6 望台镇官草村 Y =2．044 +1．401x 0．035 S Y =0．048 +0．668x 0．848 S7 望台镇官草村 Y =2．626 +2．048x 0．052 S Y =0．313 +0．436x 0．192 S8 望台镇前望台村 Y =2．349 +1．464x 0．025 S Y =0．020 +0．689x 0．937 S9 望台镇前望台村 Y =2．425 +2．051x 0．066 S Y =0．051 +0．941x 0．883 S10 望台镇道沿村 Y =1．978 +1．154x 0．019 S Y =0．198 +0．845x 0．584 S11 耿庄镇古城村 Y =2．476 +1．823x 0．044 S Y =0．339 +0．847x 0．398 S12 耿庄镇古城村 Y =2．081 +1．408x 0．033 S Y = －0．167 +0．228x 5．434 S13 耿庄镇北耿村 Y =2．250 +1．502x 0．032 S Y =0．420 +0．268x 0．027 S14 腾鳌镇东新村 Y =2．093 +1．320x 0．026 S Y =0．022 +0．400x 0．878 S注 : S． 敏感菌株 ; L． 低抗菌株 ; M． 中抗菌株 ; H． 高抗菌株3 结论与讨论海城温室蔬菜灰霉病菌对嘧霉胺表现高抗药性 ， 建议在生产上暂停使用 ， 同纪明山研究结果一致［ 1］; 海城灰霉病菌对腐霉利的抗性水平升高 ， 应加强抗药性检测和并注意药剂轮换使用 ， 延缓病菌的抗药性产生 ; 病原菌对啶酰菌胺的敏感性降低而抗性提高 ， 啶酰菌胺可在海城使用 ， 但应适时进行抗药性检测 ， 注意药剂的合理轮换 。海城地区灰霉病菌对咯菌腈的敏感性降低 ， 出现低抗和中抗菌株 ， 应引起广泛注意 ， 加强药剂的科学使用并及时进行抗药性检测 。氟啶胺对番茄灰霉病菌菌丝生长的抑制作用强于嘧霉胺 、腐霉利 、啶酰菌胺 ， 且与上述杀菌剂不存在交互抗性 ， 应进一步明确田间使用量 、田间防效 、安全性等问题 ， 为其用于灰霉病防治提供理论基础［ 8 ～9］。氟吡菌酰胺近几年开始在海城推广使用 ， 以 42． 8% 氟菌·肟菌酯悬浮剂 ( 21．4%氟吡菌酰胺 +21． 4% 肟菌酯 ) 为代表 ， 主要用于温室蔬菜白粉 、叶霉 、炭疽和靶斑等叶部病害防治 ， 调查发现该药剂使用地区范围广 、应用作物种类多 、使用频率高 ， 应加强抗药性检测 、密切关注抗药性产生情况 。参考文献 :［ 1］ 纪明山 ， 刘妍 ， 朱赫 ， 等 ． 辽宁省番茄灰霉病菌对常用杀菌剂的抗药性监测与交互抗药性 ［ J］ ． 农药 ， 2017， 56( 9) : 676 ～678．［ 2］ 杜颖 ， 付丹妮 ， 邹益泽 ， 等 ． 2017 年辽宁省番茄灰霉病菌对腐霉利的抗药性现状及机制研究 ［ J］ ． 中国蔬菜 ， 2018( 1) :58 ～65．［ 3］ 范飞 ， 李娜 ， 李国庆 ， 等 ． 湖北省草莓保护地灰霉病菌的抗药性研究 ［ C］ ． 中国植物病理学会 2016 年学术年会论文集 ．［ 4］ 徐大同 ． 山东地区灰霉病菌对常用杀菌剂的抗性检测及对氟菌唑和氟啶胺的敏感性 ［ D］ ． 泰安 : 山东农业大学 ， 2015．［ 5］ Yan LIU， Zhiqiu QI， BaoYan HAN， et al． Baseline Sensitivi-tYof Botrytis cinerea from Liaoning Province to Boscalid［ J］ ．Agricultural Science ＆ Technology， 2015， 16( 11) : 2531 ～2534．［ 6］ 刘超 ． 果蔬灰霉病的抗药性检测及其生防菌的分离 ［ D］ ． 济宁 : 曲阜师范大学 ， 2014．［ 7］ 王�