生菜资源表型性状变异及其与SSR标记的关联分析_王书珍.pdf

书北方园艺２０１８（０５）１－６ Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ研究论文第一作者简介王书珍（１９８４－），女，博士，副教授，现主要从事植物遗传学等研究工作。Ｅ－ｍａｉｌｗａｎｇｓｈｕｚｈｅｎ０４＠１６３．ｃｏｍ． 责任作者汪爱华（１９７９－），女，博士，高级农艺师，现主要从事叶类蔬菜品种筛选和种质改良等研究工作。Ｅ－ｍａｉｌｗａｎｇａｉｈｕａｌｔ＠１６３．ｃｏｍ．基金项目湖北省自然科学基金资助项目（２０１５ＣＦＣ８１６）；国家大宗蔬菜产业技术体系试验站资助项目（ＣＡＲＳ－２３－Ｇ－２６）；大别山特色资源开发湖北省协同创新中心团队资助项目（２０１５ＴＤ０７）。收稿日期２０１７－１０－３０ｄｏｉ１０．１１９３７／ｂｆｙｙ．２０１７３１５５生菜资源表型性状变异及其与ＳＳＲ标记的关联分析王 书 珍１，王 斌 才２，黄 兴 学２，李 志 良１，周 国 林２，汪 爱 华２（１．经济林木种质改良与资源综合利用湖北省重点实验室，黄冈师范学院 生命科学学院，湖北 黄冈４３８０００；２．武汉市农业科学技术研究院 蔬菜科学研究所，湖北 武汉４３００６５）摘要从世界范围内搜集的３００多份生菜资源中筛选３０份优质资源作为研究对象，调查１２个表型性状变异，并进行ＳＳＲ分子标记分析，探究表型性状与ＳＳＲ标记之间的相关关系，以期为生菜分子标记辅助育种提供参考依据。结果表明调查的３０份资源表型性状均存在极显著差异，平均变异系数最大的为株幅（４０．２５６％）。１２个表型性状将３０份生菜资源分成两大类，３０份资源的遗传距离变化范围为０．０８３～０．６６７。１４个多态性ＥＳＴ－ＳＳＲ标记在３０份生菜资源中扩增的条带数为３～８，ＨＯ和ＨＥ的平均值分别为０．１５６和０．６８０，ＰＩＣ值变化范围为０．４６６～０．７７１。同样，１４个标记将３０份资源分成两大类，３０份资源间的遗传距离为０．０３２～２．６２９，表型性状聚类结果与ＳＳＲ标记聚类结果不相关。以单一性状聚类结果与ＳＳＲ标记聚类结果进行相关性分析，大部分标记均与表型性状有相关性，且大部分引物组合表现为累积效应。关键词生菜；表型性状；ＳＳＲ标记；关联分析；种质改良中图分类号Ｓ ６３６．２０２．４ 文献标识码Ａ 文章编号１００１－０００９（２０１８）０５－０００１－０６生菜（Ｌａｃｔｕｃａ ｓａｔｉｖａ Ｌ．）属菊科莴苣属一二年生草本，别名叶用莴苣，包括散叶生菜、半结球生菜、结球生菜等，是世界范围内广泛种植食用的低糖、低脂类蔬菜。生菜营养价值极高，富含多种维生素、矿物质、有机酸、核黄素等活性成分，以及具有减肥功效的膳食纤维，能够分解食物中亚硝胺等致癌物质而被誉为“抗癌蔬菜”［１－２］。随着对生菜保健功能认识的深入，人们对其品质的要求逐渐提高，尤其是表型性状。表型性状多为数量性状且受多基因互作影响，且形态学特征与分子标记具有紧密联系［３－４］。ＥＳＴ－ＳＳＲ（ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｔａｇｓ－ｓｉｍｐｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅｐｅａｔ）是从功能基因内开发的标记，具有重复性强、共显性等特点，能够缩小目标性状相关联的分子标记的筛选范围，在动植物的遗传多样性检测、ＱＴＬ和目标基因定位、遗传连锁图的构建、杂种优势的预测、分子标记辅助育种（ｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒ ａｓｓｉｓｔｅｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ＭＡＳ）等领域作用重大［５－６］。该研究以３０份生菜资源为研究对象，将叶形、株型等数据与ＳＳＲ分子标记进行关联分析，以期筛选与表型性状紧密关联的标记位点，为相关基因的克隆和分析做铺垫，也为生菜的种质改良提供参考依据。１ 材料与方法１．１ 试验材料武汉市蔬菜科学技术研究所２０１０年开始从世界各地引入３００份生菜资源，在前期温室栽培及田间试验的研究基础上，将形态及培育周期差异明显的３０份资源作为研究对象。在试验基地（东经１１４２０′，北纬３０３７′）种植两季，定植株行距为２０ｃｍ２５ｃｍ，每个品种种植５０～７０株，常规日常管理。２０１６年秋季，每个品种随机选３～５株健康叶片，放入硅胶中干燥，自封袋封存后于－７０℃保存并用于ＳＳＲ标记分析。１．２ 试验方法１．２．１ 表型形状的调查３０份生菜资源（标号Ｗ１～Ｗ３０），除去病害植株，选取长势一致的植株，每个品种选取１０株，连续３个种植期田间观察叶色、叶型、叶形、叶缘、叶边、结球与否、株型、长势。测量株高、株幅，统计叶片数，测定最大叶面积，每份资源统计１０个个体的平均值。１．２．２ 基因组ＤＮＡ提取及ＰＣＲ扩增采用改良的ＣＴＡＢ法提取生菜基因组ＤＮＡ，１％琼脂糖凝胶电泳检测完整度，经紫外分光光度计测定ＤＮＡ的浓度，并将ＤＮＡ浓度稀释至１００ｎｇμｇ－１，于－２０℃保存备用［７］。引物是前期基于ＮＣＢＩ数据库登陆的生菜ＥＳＴ序列设计合成的，挑选其中１００对进行扩增，经凝胶电泳分析后，最终筛选出１４对多态性高、谱带清晰、重复性好的ＥＳＴ－ＳＳＲ引物进行试验（表１）。采用１０μＬ的ＰＣＲ反应体系进行扩增，体系含５μＬ的２ＴａｑＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ ｍｉｘ，１００ｎｇ基因组ＤＮＡ，２０ｍｍｏｌＬ－１正反向引物０．１μＬ，灭菌去离子水补足剩余体积。ＰＣＲ扩增程序为９４℃预变性５ｍｉｎ，３５个扩增循环（９４℃变性３０ｓ，最适退火温度下退火４０ｓ，７２℃延伸４０ｓ），最后增加一个７ｍｉｎ的７２℃延伸阶段。ＰＣＲ扩增产物采用６％的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，统计不同个体的基因型。表１多态性引物信息Ｔａｂｌｅ １ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｐｒｉｍｅｒｓ位点Ｌｏｃｉ正向引物（５′－３′）Ｆｏｒｗａｒｄ ｐｒｉｍｅｒ（５′－３′）反向引物（５′－３′）Ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒｉｍｅｒ（５′－３′）退火温度（Ｔｍ）Ａｎｎｅａｌｉｎｇｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ重复基序Ｒｅｐｅａｔ ｍｏｔｉｆ等位基因Ｎａ观察杂合度ＨＯ期望杂合度ＨＥ多态性信息含量ＰＩＣＬＳ－０１ ＡＣＡＡＡＡＣＣＣＣＴＧＡＴＡＧＡＡ ＧＧＡＡＣＣＡＴＴＣＡＡＧＧＡＣＣ ５５（ＴＣ）２４ ３ ０．３６０ ０．６３８ ０．５５４ＬＳ－０２ ＣＴＣＣＡＴＡＡＣＣＡＡＡＡＣＣＴＣ ＴＴＣＴＴＴＣＧＡＣＡＴＧＣＴＴＣＴ ５８（ＡＧ）２５ ４ ０．０８３ ０．５９０ ０．５０８ＬＳ－０３ ＴＧＧＣＡＧＡＡＧＡＴＧＧＡＧＴＡ ＣＡＴＣＡＴＣＡＴＣＡＣＣＡＣＣＡ ５４（ＡＴＣ）１８ ４ ０．１１１ ０．７０４ ０．６３０ＬＳ－０４ ＣＣＡＴＡＡＣＣＡＡＡＡＣＣＴＣＡ ＣＴＴＣＴＴＴＣＧＡＣＡＴＧＣＴＴ ５４（ＴＣ）２３ ６ ０．０００ ０．６９１ ０．６３９ＬＳ－０５ ＴＧＣＴＧＡＴＧＡＴＡＣＣＴＧＴＧＡ ＣＣＡＣＴＡＣＴＴＧＴＣＣＣＴＴＴ ５６（ＴＣ）２２ ５ ０．０００ ０．６３６ ０．５５３ＬＳ－０６ ＴＣＴＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＣＴＡＣ ＴＧＡＴＧＡＡＧＣＴＡＣＡＣＧＡＡ ５５（ＣＴ）２３ ５ ０．０００ ０．７６０ ０．７０５ＬＳ－０７ ＣＴＣＣＡＴＡＡＣＣＡＡＡＡＣＣＴ ＡＣＴＴＣＴＴＴＣＧＡＣＡＴＧＣＴ ５４（ＣＴ）２４ ３ ０．０００ ０．５７４ ０．４６６ＬＳ－０８ ＧＣＡＣＴＣＣＡＣＡＴＴＡＣＣＡＣＣ ＧＡＡＧＣＣＧＣＴＧＴＴＴＣＣＡＴＣ ５６（ＧＡ）２１ ８ ０．２３３ ０．７７５ ０．７３７ＬＳ－０９ ＡＡＣＣＡＡＡＡＣＣＴＣＡＡＣＴＣ ＣＴＴＣＡＴＴＣＡＣＴＴＣＴＴＴＣＧ ５３（ＴＣ）２５ ８ ０．２００ ０．８１５ ０．７７１ＬＳ－１０ ＴＴＧＴＣＴＣＧＴＣＴＣＧＡＣＣＡ ＧＴＴＣＴＧＡＡＧＴＡＧＣＣＡＴＧ ５５（ＡＧ）２３ ４ ０．０４３ ０．６２５ ０．５４６ＬＳ－１１ ＣＣＴＣＣＡＴＡＡＣＣＡＡＡＡＣＣＴ ＴＴＣＴＴＴＣＧＡＣＡＴＧＣＴＴＣＴ ５５（ＴＣ）２３ ４ ０．６８０ ０．６４４ ０．５６５ＬＳ－１２ ＡＣＡＧＡＴＣＴＣＡＡＡＣＡＡＣＣＣ ＣＣＣＡＴＡＣＣＴＴＴＴＣＡＣＴＣ ５７（ＧＡＴ）１５ ７ ０．０３６ ０．７９５ ０．７５０ＬＳ－１３ ＧＧＧＡＧＡＴＡＣＴＡＣＣＣＴＣＡ ＴＡＡＣＣＴＣＴＴＣＡＧＴＴＧＣＣ ５４（ＣＴ）２２ ３ ０．２２２ ０．６０１ ０．４８９ＬＳ－１４ ＴＡＣＡＴＣＴＧＧＡＣＴＴＴＧＴＧ ＡＧＧＡＴＴＴＣＴＴＴＧＣＣＴＡＴ ５５（ＡＧ）２１ ３ ０．１１５ ０．６０４ ０．４９１平均值Ｍｅａｎ － － ４．９３３０．１５６ ０．６８０ ０．６００标准差Ｓｔａｎｄａｒｄ ｄｅｖｉａｔｉｏｎ－ １．７６９ ０．１７８ ０．０７９ ０．１０１１．２．３ ＳＳＲ标记与品质性状的关联分析对１２个表型性状进行方差分析和聚类分析，计算各性状的平均值、变异系数及重复力（Ｒ）［３］。根据电泳图谱条带的有无建立“０／１”二元矩阵有带为１，无带为０。采用并用Ａｒｌｉｑｕｉｎ软件计算遗传多样性和连锁不平衡。利用ＰＩＣＣａｌｃ ０．６软件２北方园艺３月（上）计算每个标记的多态性信息含量。采用ＮＴＳＹＳ２．２１软件计算距离系数，聚类分析并建立聚类树状图。根据遗传距离矩阵分析ＳＳＲ标记位点与形态性状的相关性。２ 结果与分析２．１ 生菜表型性状变异分析和聚类分析方差分析表明，１２个表型性状在３０份生菜资源间差异达到极显著水平，表明生菜表型变异大，遗传多样性丰富。株高、株幅、叶片数、最大叶等４个表型性状的变异系数（ＣＶ）在２０．９９１％～４０．２５６％，变异最大的为株幅，最小的为叶片数。这４个性状的重复力（Ｒ）均比较高，变化范围为０．８１８～０．９９７，其中重复力最低的是叶片数，最高的是株幅（表２）。表２各品种间表型性状变异Ｔａｂｌｅ ２ Ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ ｔｒａｉｔｓ ａｍｏｎｇ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｖａｒｉｅｔｉｅｓ编号Ｎｕｍｂｅｒ表型性状Ｔｒａｉｔｓ平均值Ｍｅａｎ ｖａｌｕｅ最大值Ｍａｘｉｍｕｍ ｖａｌｕｅ最小值Ｍｉｎｉｍｕｍ ｖａｌｕｅ标准差Ｓｔａｎｄａｒｄ ｄｅｖｉａｔｉｏｎ变异系数（ＣＶ）Ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｏｆ ｖａｒｉａｔｉｏｎ／％重复力Ｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙ１ 株高／ｃｍ １５．０８３ ２８ ７ ４．１２７ ２７．３６２ ０．９８６２ 株幅／ｃｍ２ ７６１．３３０ １ ５６０ ２８９ ３０６．４８０ ４０．２５６ ０．９９７３ 叶片数 ２２．４３３ ３３ １４ ４．７０９ ２０．９９１ ０．８１８４ 最大叶面积／ｃｍ２ ２０９．２６７ ３２４ ７２ ７４．８５３ ３５．７６９ ０．９６２叶色多为深绿、绿色、浅绿，其次还有翠绿、暗绿、绿白、深紫红色；叶型多为扇形、长圆形、近圆形，其次为圆形、长扇形、狼耳尖形叶；叶形多为皱缩、微皱、较光滑、特皱缩，其次还有近全缘、近光滑、较皱缩。２２份生菜资源的叶缘为全缘，其余８份为近全缘。１０份为半结球资源，１８份不结球，２份为结球。叶边有折叠、波浪折叠、稀锯齿波浪、稀波浪、密尖刺波浪折叠、微波浪、锯齿波浪、尖刺状、钝齿状、钝尖状波浪折叠等类型。株型６份为散状，１９份为紧凑型，５份为较紧凑型。１０份资源长势中等，１３份长势旺盛，３份特旺盛，４份长势较弱。图１１２个表型性状聚类结果Ｆｉｇ．１ Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ １２ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ ｔｒａｉｔｓ３０份生菜资源被分为两大类，ｗ１、ｗ５、ｗ１８等２７份生菜被分到第一类中，第二大类仅仅包括ｗ６、ｗ７、ｗ１１等３份资源（图１）。在相关系数为０．２５处，第一类的２７份资源被分为２类，分别包３ 第５期北方园艺括２０份和７份资源。表型性状相似的资源被聚到一起，聚类结果与地理起源并不完全一致。２．２ ＳＳＲ引物多态性分析在所设计合成的１００个ＥＳＴ－ＳＳＲ标记中，１４个标记是多态性的，扩增条带数为３～８，平均每个位点为４．９３３（表１）。引物ＬＳ０－０８和ＬＳ－０９扩增的等位基因最多，均为８个等位基因。ＬＳ－０１、ＬＳ－０７、ＬＳ－１３、ＬＳ－１４标记扩增的等位基因最少，仅为３个。观察杂合度（ＨＯ）和期望杂合度（ＨＥ）的变化范围分别为０．０００～０．６８０和０．５７４～０．８１５，平均值分别为０．１５６和０．６８０。多态性信息含量ＰＩＣ值变化范围为０．４６６～０．７７１，平均为０．６００，ＰＩＣ值最高的是ＬＳ－０９位点，最低的是ＬＳ－０７位点。１４个标记将３０份资源分成两大类，第一大类仅包括ｗ１和ｗ１２等２份资源，其余的２８份被聚成第二大类。在相关系数１．４３处，第二大类又被分为２类，分别包括２３份和５份生菜资源（图２）。图２生菜资源ＳＳＲ标记的聚类结果Ｆｉｇ．２ Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇｒｅｓｕｌｔｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒｓ２．３ 表型性状与ＳＳＲ标记关联分析将表型性状的距离矩阵与ＳＳＲ分子标记聚类的距离矩阵进行相关性分析，得到拟合方程ｙ＝１．３１０ ５ｘ＋０．２６０ ９，二者的相关系数为０．０４２ ２７，即相关性不显著，１４个微卫星位点反映的差异与各材料的表型性状无相关性。将每个表型性状进行聚类，每对引物也进行单独聚类，再将每个表型性状距离矩阵与每对ＳＳＲ引物聚类的距离矩阵进行相关性分析。在进行的４２０个两两相关分析中，各表型性状与ＳＳＲ引物达到极显著相关（Ｐ＜０．０１）水平的引物数在１～５对，相关系数范围为－０．４２８～０．２８９。ＬＳ－１３标记与叶色的相关系数最大，达到－０．４２８。与叶形和株高性状达到显著相关水平的引物最多，均为５对，分别是ＬＳ－０１、ＬＳ－０２、ＬＳ－０４、ＬＳ－０８、ＬＳ－１３和ＬＳ－０３、ＬＳ－０５、ＬＳ－０６、ＬＳ－０７、ＬＳ－１０（表３）。仅发现１个ＥＳＴ－ＳＳＲ标记分别与叶色（ＬＳ－１３）、结球（ＬＳ－０１）、叶片数（ＬＳ－０５）等表型性状显著相关。ＬＳ－０１引物与叶型、叶形、叶缘、叶边、结球等５个表型性状相关，同样ＬＳ－０９引物也与叶缘、叶边、株型、株幅、最大叶面积等５个性状相关联。然而，ＬＳ－１１、ＬＳ－１２、ＬＳ－１４等３个引物与１２个表型性状均无相关性。３ 讨论与结论连锁不平衡（１ｉｎｋａｇｅ ｄｉｓｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ，ＬＤ）是不同基因座位上等位基因的非随机组合，关联分析以连锁不平衡为基础，无须构建作图群体，鉴定群体内目标性状与遗传标记或候选基因关系的分析方法［８］。关联分析已经广泛用于水稻、玉米、大４北方园艺３月（上）表３单一叶形性状与各引物的相关性分析Ｔａｂｌｅ ３ Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｓｉｎｇｌｅ ｌｅａｆ ｓｈａｐｅ ｔｒａｉｔｓ ａｎｄ ｐｒｉｍｅｒ ｐａｉｒｓ表型性状Ｔｒａｉｔｓ相关的ＥＳＴ－ＳＳＲ引物Ｒｅｌａｔｅｄ ＥＳＴ－ＳＳＲ ｐｒｉｍｅｒ ｐａｉｒｓ相关引物数Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｐｒｉｍｅｒｓ单个引物最大相关系数Ｍａｘｉｍｕｍ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｏｆ ｓｉｎｇｌｅ ｐｒｉｍｅｒ叶色Ｌｅａｆｃｏｌｏｒ ＬＳ－１３ １ －０．４２８叶型Ｌｅａｆｔｙｐｅ ＬＳ－０１、ＬＳ－０３ ２ ０．２８９叶形Ｌｅａｆｓｈａｐｅ ＬＳ－０１、ＬＳ－０２、ＬＳ－０４、ＬＳ－０８、ＬＳ－１３ ５ －０．２４１叶缘Ｌｅａｆｍａｒｇｉｎ ＬＳ－０１、ＬＳ－０６、ＬＳ－０９ ３ －０．２８０叶边ＬｉｍｂＬＳ－０１、ＬＳ－０３、ＬＳ－０９、ＬＳ－１０ ４ －０．２１６结球Ｈｅａｄｉｎｇ ＬＳ－０１ １ ０．２４３株型Ｐｌａｎｔｔｙｐｅ ＬＳ－０９、ＬＳ－１０ ２ －０．２６４长势ＧｒｏｗｔｈＬＳ－０２、ＬＳ－０６ ２ －０．２５０株高Ｈｅｉｇｈｔ ＬＳ－０３、ＬＳ－０５、ＬＳ－０６、ＬＳ－０７、ＬＳ－１０ ５ ０．２７１株幅Ｓｃｏｐｅ ＬＳ－０２、ＬＳ－０６、ＬＳ－０９ ３ －０．２４８叶片数Ｎｕｍｂｅｒｏｆ ｌｅａｖｅｓ ＬＳ－０５ １ ０．２７０最大叶面积Ｔｈｅｂｉｇｇｅｓｔ ｌｅａｆ ａｒｅａ ＬＳ－０９、ＬＳ－１０ ２ ０．２６７麦、鸭、猪等经济物种性状基因的定位研究［９－１３］。例如，赖勇等［１４］采用连锁不平衡分析在大麦中找到了与株高、穗长、芒长、穗粒数等表型性状紧密联系的ＳＳＲ位点。然而，对于生菜品质性状与分子标记的关联分析尚鲜见报道。植物数量形状受环境影响较大，表型性状难以准确测量其遗传变异。根据叶色、叶型、叶形、叶缘、叶边、结球与否、株型、长势、株高、株幅、叶片数、最大叶面积的分类，从生菜种质库中抽取表型性状差异显著的３０份生菜资源作为参考材料，种植在环境条件一致的苗圃地，且采用完全随机区组设计，最大程度地消除了环境因素造成的个体表型差异。所选生菜资源的表型性状存在丰富的遗传多样性，其中株高、株幅、叶片数、最大叶面积等４个表型性状的变异系数为２０．９９１％～４０．２５６％，且各性状在不同功能材料间存在极显著差异，４个性状的重复力（Ｒ）均大于０．８００，即此４个性状中遗传因素占主导地位。１４个位点的等位基因数平均为４．９３３，ＰＩＣ值变化范围较大（０．４６６～０．７７１），即所检测的生菜资源遗传变异比较丰富。刘超［１５］采用３５个ＳＳＲ标记与４４个表型性状的关联研究中，相关系数达到０．７２９ ５，即极显著相关性。该研究中，叶形和株高２个性状均与ＬＳ－０３点紧密关联，且表现为累积效应，表明该性状受多基因共同作用。叶色性状与ＬＳ－１３标记的相关系数达到－０．４２８，因此开发更多的额标记进行范围的基因组扫描和表型性状关联分析仍需进行。该研究对于生菜表型性状目的基因的克隆，以及生菜种质资源的育种和品质性状改良意义重大。然而，关联位点与性状间关系及作用机理和方式尚不清楚，需后续的深入研究。参考文献［１］ＪＡＭＩＥ Ｐ，ＳＡＬＴＶＥＩＴ Ｍ Ｅ．Ｐｏｓｔｈａｒｖｅｓｔ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｂｒｏｃｃｏ－ｌｉ ａｎｄ ｌｅｔｔｕｃｅ ｄｕｒｉｎｇ ｓｔｏｒａｇｅ ｉｎ ａｒｇｏｎ，ｈｅｌｉｕｍ，ａｎｄ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ａｔ ｍｏ－ｓｐｈｅｒｅｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ２％ｏｘｙｇｅｎ［Ｊ］．Ｐｏｓｔｈａｒｖｅｓｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｔｅｃｈ－ｎｏｌｏｇｙ，２００２，２６（１）１１３－１１６．［２］ＳＵＮ Ｊ，ＣＨＵ Ｙ Ｆ，ＷＵ Ｘ，ｅｔ ａｌ．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｎｄ ａｎｔｉｐｒｏｌｉｆ－ｅｒａｔｉｖｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｃｏｍｍｏｎ ｆｒｕｉｔｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ａｎｄＦｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２，５０（２５）７４４９－７４５４．［３］左力辉，张文林，邱彤，等．新疆野苹果叶形性状变异及其与ＳＳＲ标记关联分析［Ｊ］．园艺学报，２０１５，４２（４）７５９－７６８．［４］ＬＩＵ Ｃ，ＧＥ Ｙ，ＷＡＮＧ Ｄ Ｊ，ｅｔ ａｌ．Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕ－ｌａｒ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｉｎ ａ ｇｅｒｍｐｌａｓｍ ｃｏｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｅｄ ｐｕｍｐｋｉｎ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎ－ｔｉａ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｅ，２０１３，１５４８－１６．［５］ＥＬ－ＲＯＤＥＮＹ Ｗ，ＫＩＭＵＲＡ Ｍ，ＨＩＲＡＫＡＷＡ Ｈ，ｅｔ ａｌ．Ｄｅ－ｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ＥＳＴ－ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒｓ ａｎｄ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｌｉｎｋａｇｅ ｍａｐ ｉｎｆａｂａ ｂｅａｎ（Ｖｉｃｉａ ｆａｂａ）［Ｊ］．Ｂｒｅｅｄｉｎｇ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１４，６４（３）２５２．［６］ＣＵＢＲＹ Ｐ，ＰＵＪＡＤＥ－ＲＥＮＡＵＤ Ｖ，ＧＡＲＣＩＡ Ｄ，ｅｔ ａｌ．Ｄｅ－ｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｎｅｗ ｓｅｔ ｏｆ １６４ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＥＳＴ－ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒｓ ｆｏｒ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｓｔｕｄｉｅｓ ｉｎ ｒｕｂｂｅｒｔｒｅｅ（Ｈｅｖｅａ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ Ｍｌ．Ａｒｇ．）［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ，２０１４，１３３（３）４１９－４２６．［７］ＷＡＮＧ Ｓ Ｚ，ＰＡＮ Ｌ，ＨＵ Ｋ，ｅｔ ａｌ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｃｈａｒａｃ－ｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｉｔｅ ｍａｒｋｅｒｓ ｉｎ Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ５ 第５期北方园艺ｃｈａｒａｎｔｉａ（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅ）［Ｊ］．Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｏｔａｎｙ，２０１０，９７（８）ｅ７５．［８］ＫＲＡＡＫＭＡＮ Ａ Ｔ，ＮＩＫＳ Ｒ Ｅ，ｖａｎ ｄｅｎ ＢＥＲＧ Ｐ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｌｉｎｋａｇｅ ｄｉｓｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ ｍａｐｐｉｎｇ ｏｆ ｙｉｅｌｄ ａｎｄ ｙｉｅｌｄ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｉｎｍｏｄｅｒｎ ｓｐｒｉｎｇ ｂａｒｌｅｙ ｃｕｌｔｉｖａｒｓ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２００４，１６８（１）４３５－４４６． ［９］ＺＨＡＯ Ｋ Ｙ，ＴＵＮＧ Ｃ Ｗ，ＥＩＺＥＮＧＡ Ｇ Ｃ，ｅｔ ａｌ．Ｇｅｎｏｍｅ－ｗｉｄｅ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｍａｐｐｉｎｇ ｒｅｖｅａｌｓ ａ ｒｉｃｈ ｇｅｎｅｔｉｃ ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ ｏｆｃｏｍｐｌｅｘ ｔｒａｉｔｓ ｉｎ Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ，２０１１（２）４６７．［１０］ＦＬＩＮＴ－ＧＡＲＣＩＡ Ｓ Ａ，ＴＨＵＩＬＬＥＴ Ａ，ＹＵ Ｊ，ｅｔ ａｌ．Ｍａｉｚｅａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎＡ ｈｉｇｈ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｐｌａｔｆｏｒｍ ｆｏｒ ＱＴＬ ｄｉｓ－ｓｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ Ｊ，２００５，４４１０５４－１０６４．［１１］ＭＡＣＣＡＦＥＲＲＩ Ｍ，ＳＡＮＧＵＩＮＥＴＩ Ｍ Ｃ，ＥＮＲＩＣＯ Ｎ，ｅｔ ａｌ．Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｌｏｎｇ－ｒａｎｇｅ ｌｉｎｋａｇｅ ｄｉｓｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ ｉｎ ａｄｕｒｕｍ ｗｈｅａｔ ｅｌｉｔｅ ｃｏｌｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｍｏｌ Ｂｒｅｅｄ，２００５（１５）２７１－２８９．［１２］方梅霞，李莹，徐海平，等．ＧＨＲＬ及其受体ＧＨＳＲ基因多态性与鸭生长及屠体性状的关联性［Ｊ］．畜牧兽医学报，２０１１，４２（１）１８－２４．［１３］覃立立，蔡更元，张豪，等．猪骨和皮脂性状相关ＥＳＴｓ的ＳＮＰｓ筛查与关联分析［Ｊ］．中国农业科学，２０１１，４４（１６）３４０３－３４１２． ［１４］赖勇，王鹏喜，范贵强，等．大麦ＳＳＲ标记遗传多样性及其与农艺性状关联分析［Ｊ］．中国农业科学，２０１３，４６（２）２３３－２４２．［１５］刘超．籽用南瓜种质资源遗传多样性研究［Ｄ］．哈尔滨东北农业大学，２０１２．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｂｅｔｗｅｅｎ Ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｉｔｅ Ｌｏｃｉ ａｎｄＰｈｅｎｏｔｙｐｉｃ Ｔｒａｉｔｓ ｉｎ Ｌａｃｔｕｃａ ｓａｔｉｖａ Ｌ．ＷＡＮＧ Ｓｈｕｚｈｅｎ１，ＷＡＮＧ Ｂｉｎｃａｉ ２，ＨＵＡＮＧ Ｘｉｎｇｘｕｅ２，ＬＩ Ｚｈｉｌｉａｎｇ１，ＺＨＯＵ Ｇｕｏｌｉｎ２，ＷＡＮＧ Ａｉｈｕａ２（１．Ｈｕｂｅｉ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｅｃｏｎｏｍｉｃ Ｆｏｒｅｓｔ Ｇｅｒｍｐｌａｓｍ Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ａｎｄ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ／Ｃｏｌｅｇｅｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｈｕａｎｇｇａｎｇ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｕａｎｇｇａｎｇ，Ｈｕｂｅｉ ４３８０００；２．Ｗｕｈａｎ Ｖｅｇｅｔａｂｌｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＷｕｈａｎＡｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｗｕｈａｎ，Ｈｕｂｅｉ ４３００６５）ＡｂｓｔｒａｃｔＡｍｏｎｇ３００ｌｅｔｔｕｃｅ ｇｅｒｍｐｌａｓｍｓ ｃｏｌｅｃｔｅｄ ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ，３０ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ａｓ ｍａｔｅｒｉａｌｓｆｏｒ ｔｈｅ ｓｕｒｖｅｙｏｆ ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ ｖａｒｉａｔｉｏｎ．Ａｎｄ １２ｔｒａｉｔｓ ｗｅｒｅ ｓｕｒｖｅｙｅｄ，ＳＳＲ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒｅｄ ａｎａｌｙｓｉｓｗａｓ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｉｔｅ ｌｏｃｉ ａｎｄ ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ ｔｒａｉｔｓ ｗｅｒｅ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄｔｏ ｐｒｏｖｉｄｅ ｔｈｅ ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒ ａｓｓｉｓｔｅｄ ｂｒｅｅｄｉｎｇｏｆ ｌｅｔｔｕｃｅ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄｔｈａｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｅｘｉｓｔｅｄ ｉｎ ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ ｔｒａｉｔｓ，ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｍａｒｋａｂｌｅ ｏｎｅ ｗａｓ ｓｔｒａｉｎ ａｍｐｌｉｔｕｄｅ（４０．２５６％）．Ｔｈｅｓｅ ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ ｔｒａｉｔｓ ｄｉｖｉｄｅｄ ｔｈｅ ３０ｌｅｔｔｕｃｅ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ｉｎｔｏ ｔｗｏ ｃａｔｅｇｏｒｉｅｓ，ｗｉｔｈ ｔｈｅｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｓｔａｎｃｅ ｒａｎｇｉｎｇ ｂｅｔｗｅｅｎ ０．０８３ａｎｄ ０．６６７．Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ，ｅａｃｈ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ＥＳＴ－ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒａｍｐｌｉｆｉｅｄ ３－８ａｌｅｌｅｓ，ａｎｄ ｔｈｅ ｍｅａｎ ＨＯａｎｄ ＨＥｗｅｒｅ ０．１５６ａｎｄ ０．６８０，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＰＩＣ ｖａｌｕｅ ｖａｒｉｅｄｆｒｏｍ ０．４６６ｔｏ ０．７７１．Ｓｉｍｉｌａｒｌｙ，ｔｈｅ １４ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒｓ ｄｉｖｉｄｅｄ ３０ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ｉｎｔｏ ｔｗｏ ｃａｔｅｇｏｒｉｅｓ，ａｎｄｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｓｔａｎｃｅ ｒａｎｇｅｄ ｆｒｏｍ ０．０３２ｔｏ ２．６２９．Ｔｈｅ ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ ｔｒａｉｔｓ ｗｅｒｅ ｎｏｔｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｔｈａｔ ｏｆ ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒｓ．Ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｓｉｎｇｌｅ ｔｒａｉｔ ａｎｄ ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒ ｓｈｏｗｅｄｔｈａｔ ｍｏｓｔ ｍａｒｋｅｒｓ ｗｅｒｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ ｔｒａｉｔｓ．Ｉｎ ｐａｒｔｉｃｕｌａｒ，ｍｏｓｔ ｍａｒｋｅｒ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓｓｈｏｗｅｄ ｃｕｍｕｌａｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔｓ．ＫｅｙｗｏｒｄｓＬａｃｔｕｃａ ｓａｔｉｖａ Ｌ．；ｔｒａｉｔ；ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒ；ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ；ｇｅｒｍｐｌａｓｍ ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ６北方园艺３月（上）